Определение этоксидола в плазме крови человека методом микроэмульсионной жидкостной хроматографии
Аннотация
Одним из важнейших направлений развития фармакологической науки является разработка и внедрение в клиническую практику лекарственных средств природного и синтетического происхождения. Ярким представителем отечественных цитопротекторов является яблочнокислая соль
3-гидрокси-6-метил-2-этилпиридина, запатентованная под торговым названием «Этоксидол». Он не уступает, а иногда и превосходит аналогичные препараты по своей фармакологической активности. В литературе найдена только одна работа, посвященная определению этоксидола в лекарственных препаратах методом вольтамперометрии. Для его определения в плазме крови чувствительность недостаточна. Необходимо было разработать более чувствительный и селективный способ.
Микроэмульсии часто используют в вариантах капиллярной электрокинетической хроматографии или пробоподготовке, но метод микроэмульсионной жидкостной хроматографии (МЭЖХ) столь широкого распространения не получил. Метод обладает определенными преимуществами перед ВЭЖХ. В данной работе осуществлено определение этоксидола в плазме крови методом высокоэффективной микроэмульсионной хроматографии с флуориметрическим детектированием. К 300 мм3 плазмы добавляли 300 мм3 микроэмульсии и тщательно перемешивали для осаждения белков плазмы. Добавление микроэмульсии позволяет предотвратить соосаждение этоксидола вместе с белками. Надосадочную жидкость отбирали и вводили в хроматограф. Степень извлечения контролировали хроматографически путем добавок известного количества этоксидола в экстракт из холостой плазмы.
В мицеллярной среде вещества могут сольватироваться иначе, чем в водно-метанольных/ацетонитрильных растворах. Изменения в спектральных характеристиках веществ вызваны наличием в составе микроэмульсии масла, внедрение веществ в каплю которого приводит к спектральному сдвигу. При определении этоксидола выбраны длины волн возбуждения и детектирования λex 287 нм и λem 399 нм соответственно. Следует отдельно подчеркнуть, что микроэмульсия дополнительно позволяет стабилизировать определяемые компоненты. Так, в случае определения этоксидола в плазме крови стандартные способы пробоподготовки (жидкостная и твердофазная экстракция, осаждение белков органическими растворителями, кислотами, ионами металлов) не привели к необходимому результату. В случае разбавления образца микроэмульсией извлечение было количественным.
Калибровочная зависимость носила линейный характер в диапазоне концентраций 0.1-10 мг/дм3. График описывается линейным уравнением S=23.97C-1.257. Коэффициент корреляции R2=0.998. Предел обнаружения 50 мкг/дм3. Относительное стандартное отклонение S(r) составляет 0.08 (n=3). Таким образом, предложен новый хроматографический метод определения этоксидола в плазме крови человека. Показано, что использование микроэмульсии в качестве элюента приводит к стабилизации препарата в растворах и значительному увеличению извлечения этоксидола из реальных образцов.
Скачивания
Литература
Ziyatdinova G.K., Budnikov G.K. Determination of mexidol. Pharm.Chem.J. 2005; 39(8): 447-448.
Berthod A., Laserna J.J., Carretero I. Oil-In-Water Microemulsions as Mobile Phases for Rapid Screening of Illegal Drugs in Sports. J. Liq. Chromatogr. & Relat. Technol. 1992; 15(17): 3115-3127.
Marsh A., Clark B.J., Altria K.D. Oil-in-water microemulsion LC determination of pharmaxeuticals using gradient elution. Chromatographia. 2005; 61: 539-547.
Buchberger, W. Microemulsion Electrokinetic Chromatography. In: Schmitt-Kopplin, P. (eds) Capillary Electrophoresis. Methods in Molecular Biology. 2016. Humana Press, New York, NY. 1483: 91-109.
Kartsova L.A., Solov'eva S.A., Bessonova E.A. Mikroemul'sionnoe koncentrirovanie steroidnyh gormonov iz vodnyh rastvorov i obrazcov mochi. ZHurnal analit. himii. 2021; 76(9): 804-811. (In Russ.)
Mahuzier P-E., Clark B.J., Bryant S.M., Altria K.D. High-speed microemulsion electrokinetic chromatography. Electrophoresis. 2001; 22(17): 3819-3823.
Pirogov A.V., SHpigun O.A. Primenenie mikroemul'sij v zhidkostnoj hromatografii i elektrokineticheskih metodah analiza. Dostoinstva i nedostatki podhoda. ZHurnal analit. himii. 2020; 75(2): 99-108. (In Russ.)
Pirogov A.V., Sokolova L.S., Sokerina E.S., Taturova O.G., Shpigun O.A. Determination of flavonoids as complexes with Al3+ in microemulsion media by HPLC method with fluorescence detection. J. Liq. Chromatogr. & Relat. Technol. 2016; 39(4): 220-224.
Kargin I.D., Sokolova L.S., Pirogov A.V., SHpigun O.A. // Opredelenie antibiotikov tetraciklinovogo ryada v moloke metodom vysokoeffektivnoj zhidkostnoj hromatografii s poslekolonochnoj reakciej i fluorimetricheskim detektirovaniem. Zavodskaya laboratoriya. 2015; 81(2): 5-9. (In Russ.)