Методологические аспекты определения оксимов стероидных гормонов методом УВЭЖХ-МСВР
Аннотация
Рассмотрены методологические аспекты применения дериватизации стероидных гормонов с использованием гидроксиламина для дальнейшего количественного анализа производных андрогенов, эстрогенов, прогестинов и глюкокортикоидов. Известно, что его использование позволяет значительно увеличить чувствительность масс-спектрометрического детектирования некоторых стероидных гормонов ввиду образования легко ионизирующихся оксимов стероидов, а реакция получения производных является простой.
Однако наряду с перечисленными достоинствами, при использовании данного способа происходит образование стереоизомеров, что приводит к расщеплению или полному разделению пиков дериватов на хроматограммах. Изменение программы градиентного элюирования не всегда позволяет получить один пик деривата без потери эффективности и селективности разделения остальных аналитов, присутствующих в пробе, что делает актуальным вопрос выбора «мишени» для анализа. Принимая во внимание наличие выраженных матричных эффектов при проведении определения стероидных гормонов и их производных в биологических жидкостях с использованием метода ВЭЖХ-МС(/МС) с электрораспылительной ионизацией, подобное поведение веществ при их хроматографическом разделении может быть использовано для повышения точности и надежности получаемых результатов благодаря интегрированию не всех пиков дериватов, а путем выбора одного, наименее подверженного матричным эффектам, обусловленным, например, коэлюированием компонентов пробы. Это связано с тем, что в процессе протекания реакции формирование их изоформ происходит воспроизводимо, с одинаковым выходом, независимо от концентраций и матрицы, в которой протекает процесс.
Приведены результаты определения некоторых оксимов стероидных гормонов, рассмотрены аспекты, влияющие на точность, воспроизводимость и чувствительность анализа на примере определения оксимов эстрона и 11α-гидроксипрогестерона в диапазоне концентраций от 2.5 до 1000 нг/см3. Идентификация производных и контроль полноты протекания реакции проводили с использованием стандартных образцов исследуемых соединений и масс-спектрометрии высокого разрешения. Показано, что данная процедура дериватизации позволяет добиться значительно большей чувствительности по сравнению с подходами, основывающимися на прямом определении стероидных гормонов с использованием ВЭЖХ-МС(/МС). В случае необходимости чувствительность может быть повышена путем применения методов предварительного концентрирования и очистки образцов.
Скачивания
Литература
Whirledge S., Cidlowski J.A., Physiology, Pathophysiology, and Clinical Management, 8th ed., Elsiver, 2019, Vol. 5, pp. 115-131. DOI: 10.1016/B978-0-323-47912-7.00005-6.
Cook-Botelho J.C., Bachmann L., French D., Mass Spectrometry for the Clinical Laboratory, Academic Press, 2017, Vol. 10, pp. 205-230. DOI: 10.1016/B978-0-12-800871-3.00010-9.
Keski-Rahkonen P., Huhtinen K., Poutanen M., Auriola S., J. Steroid. Biochem. Mol. Biol., 2011, Vol. 127(3-5), pp. 396-404. DOI: 10.1016/j.jsbmb.2011.06.006.
Kushnir M.M., Blamires T., Rockwood A.L., Roberts W.L. et al., Clin. Chem., 2010, Vol. 56(7), pp. 1138-1147. DOI: 10.1373/clinchem.2010.143222.
Liu Q., Chi Q., Fan R.-T., Tian H.-D. et al., Nat. Prod. Bioprospect., 2019, Vol. 9(3), pp. 201-208. DOI: 10.1007/s13659-019-0204-3.
Kushnir M.M., Rockwood A.L., Bergquist J., Varshavsky M. et al., Am. J. Clin. Pathol., 2008, Vol. 129(4), pp. 530-539. DOI: 10.1309/LC03BHQ5XJPJYEKG.
Kushnir M.M., Rockwood A.L., Roberts W.L., Pattison E.G. et al., Clin. Chem., 2006, Vol. 52(1), pp. 120-128. DOI: 10.1373/clinchem.2005.052167.
Kushnir M.M., Rockwood A.L., Roberts W.L., Pattison E.G. et al., Clin. Chem., 2006, Vol. 52(8), pp. 1559-1567. DOI: 10.1373/clinchem.2006.068445.
Nelson R.E., Grebe S.K., OKane D.J., Singh R.J., Clin Chem., 2004, Vol. 50(2), pp. 373-384. DOI: 10.1373/clinchem.2003.025478.
