Активность и каталитические свойства глутатионпероксидазы при токсическом поражении печени - Шульгин, Константин Константинович; Попов, Сергей Сергеевич; Веревкин, Алексей Николаевич; Попова, Татьяна Николаевна; Семенихина, Анастасия Владимировна (Сорбционные и хроматографические процессы, 2020)
Целью работы было изучение активности глутатионпероксидазы (ГП, КФ 1.11.1.9.) при нарушении функции печени, а также очистка фермента с применением хроматографических методов для дальнейшего изучения кинетических свойств. В эксперименте использовали сыворотку крови пациентов с алкогольным гепатитом, находящихся на лечении в стационаре. В качестве группы сравнения в исследование были включены практически здоровые лица с нормальными показателями общего и биохимического анализов крови. Экспериментальный токсический гепатит (ЭТГ) моделировали путем перорального введения четыреххлористого углерода самцам белых лабораторных крыс (Rattus norvegicus) Wistar. В контрольную группу входили животные, находящиеся на стандартном режиме вивария. Активность ГП определяли спектрофотометрически при длине волны 340 нм. с помощью сопряженной ферментативной реакции с глутатионредуктазой. Очистку ГП из печени крысы в нормальных условиях и при ЭТГ проводили путем гомогенизации материала, гель-фильтрации на Сефадекс G-25, ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, концентрирования фракций фермента с помощью ультрафильтрации на ячейке Amicon, гель-хроматографии на Toyopearl HW-65. Чистоту полученного ферментного препарата оценивали электрофоретическим методом. Общее количество белка в пробах определяли по методу Лоури. Показано возрастание активности маркерных ферментов развития патологии в сыворотке крови пациентов с заболеванием печени и крыс с ЭТГ. Также обнаружено изменение активности ГП в сыворотке крови больных алкогольным гепатитом и в гомогенате печени крыс при ЭТГ по сравнению с контрольным уровнем. В ходе эксперимента были получены ферментные препараты из печени контрольных животных и крыс с ЭТГ с удельной актив- ностью 1.46 и 3.64 Е/мг; с выходом 7.2 и 8.0% соответственно. В дальнейшем они использовались для изучения кинетических свойств ГП. Установлено, что при токсическом гепатите ГП менее устойчива к длительному воздействию температур по сравнению с ферментом из печени контрольных животных. Кроме того, при патологии происходит возрастание температурного оптимума и константы инактивации. На основании полученных результатов можно предположить, что изменение активности фермента при нарушении функции печени может быть связано с конформационными перестройками его молекулы в условиях повышенной генерации свободных радикалов. ЛИТЕРАТУРА 1. Калинин А.В. // Фарматека. 2005. №1(97). С. 48-55. 2. Горбенко М.В., Попова Т.Н., Шульгин К.К., Попов С.С. // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2013. Т. 76. № 10. С. 12-15. 3. Андреещева Е.М., Попова Т.Н., Артюхов В.Г., Матасова Л.В. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2004. № 4. С. 399-402. 4. Davis B.J., Jones R.G., Farmer G.R. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1964. Vol. 121. рр. 404-427. 5. Shevchenko A., Wilm H., Vorm O. // Anal. Chem. 1996. Vol. 68. pp.850-858. 6. Lowry О.Н., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. // J. Biol. Chem. 1951. Vol. 193. pp. 265-275. 7. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М. Практика. 1999. 459 с. 8. Kim J.H., Park S.H., Nam S.W., Choi Y.H. // Int. J. Mol. Sci. 2012. Vol. 13. pp. 5740-5750. 9. Попов С.С., Пашков А.Н., Попова Т.Н., Семенихина А.В. и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2007. Т. 70. № 1. С. 48-51. 10. Попов С.С., Пашков А.Н., Попова Т.Н., Золоедов В.И. и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. № 8. С. 170-173.