Применение хроматографических методов для очистки глутатионредуктазы из печени крыс с экспериментальным сахарным диабетом 2 типа - Агарков , Александр Алексеевич; Попова , Татьяна Николаевна; Чичай , Александра Сергеевна; Михалева , Ольга Сергеевна; Попова , Светлана Евгеньевна (Сорбционные и хроматографические процессы, 2021)
Целью настоящей работы явилось определение активности глутатионредуктазы (ГР, КФ 1.6.4.2) из печени крыс с экспериментальным СД2 и животных, которым на фоне патологии вводили SkQ1, а также разработка схемы очистки фермента с применением хроматографических методов. В эксперименте использовали печень крыс контрольной группы животных, со стрептозотоциновым сахарным диабетом 2 типа (СД2) и крыс с экспериментальной гипергликемией, которым вводили 10-(6’-пластохинонил) децилтрифенилфосфониума (SkQ1). СД2 индуцировали путем комбинации высокожировой диеты в течение 1 месяца и последующего двукратного внутрибрюшинного введения стрептозотоцина с интервалом 7 дней в дозе 30 мг/кг веса животного в цитратном буфере рН 4.4. SkQ1 вводили в виде раствора в дозе 1250 нмоль/кг/сут со второй недели эксперимента утром 1 раз в день. Активность ГР определяли спектрофотометрически на СФ-56 при 340 нм. Общее количество белка определяли по методу Лоури. Выявлено возрастание активности ГР в печени крыс со стрептозотоциновым СД2 относительно значений контрольной группы животных, а также установлено, что введение SkQ1 животным с патологией приводило к уменьшению активности исследуемого фермента. С помощью метода разделения белков сульфатом аммония, а также гель-фильтрации через сефадекс G-25 и ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе получены ферментные препараты ГР, очищенные в 56.5, 45.57 и 52.9 раз из печени крыс контрольной группы, животных с СД2, индуцированным стрептозотоцином, и крыс с экспериментальной гипергликемией, которым вводили SkQ1. Выявлено, что в ходе использования ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе десорбция основного пула фермента, выделенного из печени контрольных животных, наблюдалась при использовании KCl в концентрации 100 ммоль/дм3, в ходе очистки фермента из печени животных с экспериментальной гипергликемией – 50 ммоль/дм3. При использовании SkQ1 в качестве протектора на фоне патологии часть ГР, десорбирующейся с ДЭАЭ-целлюлозы при использовании KCl в концентрации 100 ммоль/дм3, увеличивалась по сравнению с патологией. Вероятно, это может быть связано с изменением общего заряда молекулы исследуемого фермента в условиях оксидативного стресса, возникающего при гипергликемии.