Применение ионообменной хроматографии для очистки гликолатоксидазы из листьев гороха (Pisum sativum L.) и сорго (Sorghum sudanense J.), исследование ее физико-химических и регуляторных свойств - Eprintsev, Alexander Trofimovich; Falaleeva, Marina Ivanovna; Komarova, Nadezhda R.; Kovaleva, Ekaterina Vadimovna; Mitkevich, Alexandra Vladislavovna (Сорбционные и хроматографические процессы, 2019)
В листьях гороха (Pisum sativum L.) и сорго (Sorghum sudanense J.) индуцировалась активность одной из изоформ гликолатоксидазы (ЛЦО-подобная ГО, КФ 1.1.3.15). С помощью многостадийной очистки, включающей фракционирование сульфатом аммония, ионобменную хроматографию на ДЭАЭ-сефацеле и гель-хроматографию на сефадексе G-200 фермент был очищен до электрофоретически гомогенного состояния. Препарат ЛЦО-подобной ГО из листьев гороха обладал удельной активностью 314.37 Е/мг белка, при этом степень очистки составила 207 раз, а выход – 11.5%. Аналогичные показатели фермента из листьев сорго составили: 274.22 Е/мг белка, степень очистки – 143 раз, а выход – 13.8%. Изучены физико-химические свойства фермента из этих объектов. Определена величина молекулярной массы нативной молекулы (182 кДа и 168 кДа для гороха и сорго соответственно), показано, что фермент состоит из четырех субъединиц, молекулярная масса которых определенная ПААГ-электрофорезом в присутствии ДДС-Na равняется 45 кДа для ГО из листьев гороха и 42 кДа – из сорго. Исследованы кинетические и регуляторные свойства: значения констант Михаэлиса, влияние концентрации ионов водорода и температуры на катализируемую реакцию.