TY - JOUR AU - Светлана Сергеевна Ольшанникова AU - Наталья Викторовна Малыхина AU - Мария Сергеевна Лавлинская AU - Андрей Викторович Сорокин AU - Марина Геннадьевна Холявка AU - Анатолий Николаевич Лукин AU - Юлия Михайловна Вышкворкина AU - Николай Евгеньевич Юдин AU - Валерий Григорьевич Артюхов PY - 2022/07/26 Y2 - 2024/03/29 TI - Разработка методики сорбционной иммобилизации бромелина на N-малеоилхитозане и изучение структурных особенностей полученного комплекса JF - Сорбционные и хроматографические процессы JA - sorpchrom VL - 22 IS - 3 SE - DO - 10.17308/sorpchrom.2022.22/9340 UR - https://journals.vsu.ru/sorpchrom/article/view/9340 AB - Бромелин – протеолитический фермент, который нашел применение в медицине и промышленности. Однако использование свободных форм ферментов имеет свои недостатки, такие как их нестабильность к изменяющимся условиям среды, трудоёмкость и сложность отделения от исходных реагентов и продуктов реакции после завершения процесса. Решить эту проблему можно с помощью иммобилизации бромелина на полисахаридах.В связи с вышесказанным, цель исследования заключалась в разработке методики сорбционной иммобилизации бромелина на N-малеоилхитозане с различными молекулярными массами и изучении структурных особенностей полученных комплексов.Осуществлен синтез N-малеоилхитозана с различными молекулярными массами и степенями замещения. Предложена методика проведения сорбционной иммобилизации бромелина на N-малеоилхитозане. Взаимодействие между носителем и ферментом изучено методами ИК-спектроскопии и гибкого молекулярного докинга, выявлены функциональные группы полисахарида и аминокислоты поверхности глобул бромелина, принимающие участие в образовании комплекса. Измерение содержания белка в иммобилизованных препаратах бромелина проводили по модифицированному методу Лоури, протеазную активность образцов определяли на субстрате – азоказеине.Показано, что взаимодействие бромелина и N-малеоилхитозана обусловлено электростатическими и гидрофобными взаимодействиями, а также образованием водородных связей между компонентами. Связи и взаимодействия с N-малеоилхитозаном образуются в том числе с участием аминокислотных остатков, составляющих активный центр энзима (Cys26 и His158), что отражается на протеолитической активности получаемых препаратов.Установлено, что оптимальное соотношение содержания белка (мг на г носителя), общей активности (в ед на мл раствора) и удельной активности (в ед на мг белка) достигается в случае использования в качестве матрицы-носителя N-малеоилхитозана с молекулярной массой 200 кДа.Полученные препараты бромелина, иммобилизованного на N-малеоилхитозане, могут стать основой для решения ряда проблем в биомедицине, возникающих при создании препаратов бактерицидного, противоотечного, антитромбического и противовирусного действий. Благодаря сочетанию относительно недорогих компонентов предлагаемый нами метод доступен для отечественных лабораторий и перспективен для дальнейшего применения в промышленности. ER -