Разработка метода получения иммуноглобулинов А и М для создания комплексного иммуноглобулинового препарата
DOI:
https://doi.org/10.17308/sorpchrom.2024.24/12512Ключевые слова:
переработка плазмы крови, иммуноглобулины А, М, G, комплексный иммуноглобулиновый препа-рат, ионообменная хроматография, гель-хроматографияАннотация
Работа посвящена исследованию возможности получения иммуноглобулинов А и М для создания комплексного иммуноглобулинового препарата, который используется для профилактики и лечения острых кишечных заболеваний. Эффективность данного препарата продемонстрирована в ходе многочисленных клинических испытаний и доказана временем, однако препарат, отвечающий всем современным требованиям по чистоте и вирусной безопасности, не выпускается у нас в стране.
Ранее нами разработана технология получения свободного от вирусов иммуноглобулина G, включающая очистку инактивированной плазмы крови на трех сорбентах: гидрофобном, DEAE и сульфокатионите [1]. Исследования показали, что на DEAE сорбенте концентрируются иммуноглобулины А и М. После внедрения технологии получения иммуноглобулина G вопрос извлечения фракции иммуноглобулинов А и М стал особенно актуальным, так как может позволить осуществлять их выделение в одной технологии с получением иммуноглобулина G, что снижает экономические издержки и позволяет комплексно решать задачи переработки плазмы крови.
В работе исследованы условия элюирования фракции иммуноглобулинов А и М для последующей очистки на различных сорбентах. Показано, что элюирование с DEAE колонны 0,075 М раствором хлорида натрия в 20мМ натрий ацетатном буферном растворе при рН 5,65, позволяет удалить более 60% полимеров в сырье. Последующую очистку осуществляли на шести различных сорбентах, отличающихся носителем (агароза и полиметакрилат) и функциональными группами (сульфокатионит, слабый и сильный анионит) в четырех буферных системах с рН 5.0; 5.65; 6.8 и 7.4. Показано, что на анионообменном сорбенте на основе метакрилата Relisorb DA 400 при рН 7.4 достигается высокий выход по иммуноглобулинам (70% для IgA и 80% для IgM) при низком содержании полимеров, что позволяет получить комплексный иммуноглобулиновый препарат, отвечающий современным требованиям.
Скачивания
Библиографические ссылки
RU, 2467783, C2. Karasev V. S., Bochko-va O. P., Staroverov S. M., Krasil'nikov I. V., Nikolaeva A. M. 2010-07-30. (In Russ.)
Di L. An update on the importance of plasma protein binding in drug discovery and development. Expert Opinion on Drug Discovery. 2021; 16(12): 1453-1465.
Goryainova O. S., Ivanova T. I., Ru-tovskaya M. V., Tillib S.V. A Method for the Parallel and Sequential Generation of Single-Domain Antibodies for the Proteo-mic Analysis of Human Blood Plasma. Mo-lecular Biology. 2017; 51:855-864.
Laursen I. A. et al. Development, manufacturing and characterization of a highly purified, liquid immunoglobulin g preparation from human plasma. Transfu-sion Medicine and Hemotherapy. 2014; 41(3): 205-212.
Schaller J, Gerber S, Kaempfer U, Lejon S, Trachsel C. Human blood plasma proteins: structure and function. John Wiley & Sons. 2008: 151-155.
Cohn E. J., Gurd F. R.N., Sur-genorD.M.,Barnes B.A., Brown R.K., Derouaux G., Gillespie J. M., Kahnt F. W., Lever W. F., Lin C.H., Mittelmann D., Mouton R. F., Schrnid K. and Uroma E. A system for the separationof the components of human blood: Quantitative procedure for the separationof the protein components of human plasma. J. amer. chem. SOC. 1950; 72: 465-476.
Kistler P., Nitschmann Hs. Large scale production of human plasma frac-tions. VoxSang. 1962; 7: 414-424.
McCulloch L. et al. Treatment with IgM‐enriched intravenous immunoglobu-lins enhances clearance of stroke‐associated bacterial lung infection. Immu-nology. 2022; 167(4): 558-575.
Buchacher A., Iberer G. Purification of intravenous immunoglobulin G from human plasma–aspects of yield and virus safety. Biotechnology Journal: Healthcare Nutrition Technology. 2006; 1(2): 148-163.
Mateljak Lukačević S. et al. Quality-related properties of equine immunoglobu-lins purified by different approaches. Tox-ins. 2020; 12(12): 798.
Wysor S. K. et al. In-line buffer ex-change in the coupling of Protein A chro-matography with weak cation exchange chromatography for the determination of charge variants of immunoglobulin G de-rived from chinese hamster ovary cell cul-tures. Journal of Chromatography A. 2024;1718: 464722.
