Сорбция апоптоз-индуцирующего фактора на поливинилиденфторидной мембране для определения его содержания в сердце крыс с диклофенак-индуцированным повреждением миокарда
DOI:
https://doi.org/10.17308/sorpchrom.2025.25/13580Ключевые слова:
диклофенак, активные формы кислорода, миокард, вестерн-блоттинг, поливинилиденфторидная мембрана, апоптоз-индуцирующий факторАннотация
В ходе настоящего исследования был осуществлен анализ уровня апоптоз-индуцирующего фактора (AIF), сорбированного на поливинилиденфторидной (PVDF) мембране, из сердца крыс (Rattus norvegicus линии Wistar) с повреждением миокарда, вызванным введением диклофенака. Лабораторные животные были распределены на две экспериментальные группы по 10 особей. Крысам контрольной группы с 15 дня эксперимента вводили внутрибрюшинно физиологический раствор на протяжении 7 дней. Животным второй группы производили подкожную инъекцию 100 мкл полного адъюванта Фрейнда в подошвенную поверхность задней лапы. Спустя 15 дней крысам внутрибрюшинно вводили диклофенак натрия в дозе 10 мг/кг, 1 раз в сутки, на протяжении 7 дней. Через 24 часа после последней инъекции крыс выводили из эксперимента, забирали образцы крови и сердца для анализа. Маркерные ферменты цитолиза кардиомиоцитов в сыворотке крови определяли с применением коммерческих наборов. Анализ состояния оксидативного статуса производили методом биохемилюминесценции, индуцированной пероксидом водорода с сульфатом железа. Для оценки уровня AIF применяли метод вестерн-блоттинга. Белки лизатов тканей сердца разделяли с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия, после чего сорбировали на PVDF мембранах в течение 1 часа при 4 °С и напряжении 35 В. После процесса сорбции мембраны инкубировали со специфическими антителами. Детекцию целевых белков осуществляли с применением вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена, и хемилюминесцентного субстрата. Уровень мРНК гена AIF определяли с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени. В результате работы было показано, что у крыс с патологией повышались параметры биохемилюминесценции в сердце и сыворотке крови, что свидетельствовало об интенсификации процессов свободнорадикального окисления. В ходе проведения вестерн-блоттинга разделенные по молекулярной массе белки из сердца крыс были успешно сорбированы на PVDF мембране, а в ходе детекции было показано значительное увеличение уровня AIF. Введение крысам диклофенака, помимо этого, приводило к возрастанию в ткани сердца уровня мРНК гена AIF. Наблюдаемые изменения могли быть связаны с усилением генерации активных форм кислорода под действием лекарственного средства и свидетельствовуют о существенной роли AIF, запускающего каспазонезависимый апоптоз, в патогенезе диклофенак-индуцированного повреждения миокарда.
Скачивания
Библиографические ссылки
Leonova M.V., Consilium Medicum, 2019, 21(10): 107-116. https://doi.org/10.26442/20751753.2019.10.190191
Seal S., Spjuth O., Hosseini-Gerami L., García-Ortegón M., Singh S., Bender A., Carpenter A.E., J Chem Inf Model., 2024, 64(4): 1172-1186. https://doi.org/10.1021/acs.jcim.3c01834
Gül M., Kandemir Ö., Akaras N., Şimşek H., Çağlayan C., Bratisl. Med. J., 2025, 126: 2543-2555. https://doi.org/10.1007/s44411-025-00268-5
Thai P.N., Ren L., Xu W., Overton J., Timofeyev V., Nader C.E., Haddad M., Yang J., Gomes A.V., Hammock B.D., Chiamvimonvat N., Sirish P., Cardiovasc Drugs Ther., 2023, 37(1): 25-37. https://doi.org/10.1007/s10557-021-07253-4
Murphy E., Steenbergen C., Physio-logical Reviews, 2008, 8: 581-609. https://doi.org/10.1152/physrev.00024.2007
Zhou W., Ji L., Liu X., Tu D., Shi N., Yangqu W., Chen S., Gao P., Zhu H., Ruan C., Biomedical Journal, 2022, 45(6): 870-882. https://doi.org/10.1016/j.bj.2021.11.012
Al-Lawati H., Vakili M.R., Lavasa-nifar A., Ahmed S., Jamali F., Mol Pharm., 2020, 17(4): 1377-1386. https://doi.org/10.1021/acs.molpharmaceut.0c00069
Piskarev I.M., Trofimova S.V., Burkhina O.E., Ivanova I.P., Biophysics., 2015, 60: 400e408. https://doi.org/10.1134/S0006350915030148
Jacob R., Khan M., Indian J. Cardi-ovasc. Dis. Women, 2018, 3: 240-244. https://doi.org/10.1055/s-0039-1679104
Jennings R.B., Circulation Re-search, 2013, 113: 428-438. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.113.300987
Hanna V.S., Hafez E.A.A., Adv Res., 2018, 11: 23-32. https://doi.org/10.1016/j.jare.2018.03.005
Panth N., Paudel K.R., Parajuli K., Adv Med., 2016, 2016: 9152732. https://doi.org/10.1155/2016/9152732
He J., Liu D., Zhao L., Zhou D., Rong J., Zhang L., Xia Z., Experimental and Therapeutic Medicine, 2022, 23(6): 430. https://doi.org/10.3892/etm.2022.11357
Ma C., Wang X., He S., Zhang L., Bai J., Qu L., Qi J., Zheng X., Zhu X., Mei J., Guan X., Yuan H., Zhu D, Cell Biosci., 2022, 12: 9. https://doi.org/10.1186/s13578-022-00744-3
Qamar A., Zhao J., Xu L., McLeod P., Huang X., Jiang J., Liu W., Haig A., Zhang Z.-X., Int. J. Mol. Sci., 2021, 22: 11038. https://doi.org/10.3390/ijms222011038
