Применение ионообменной хроматографии для очистки гликолатоксидазы из листьев гороха (Pisum sativum L.) и сорго (Sorghum sudanense J.), исследование ее физико-химических и регуляторных свойств

Alexander Trofimovich Eprintsev; Marina Ivanovna Falaleeva; Nadezhda R. Komarova; Ekaterina Vadimovna Kovaleva; Alexandra Vladislavovna Mitkevich

doi:10.17308/sorpchrom.2019.19/650

Авторы

Alexander Trofimovich Eprintsev Епринцев Александр Трофимович – профессор кафедры биохимии и физиологии клетки, д.б.н., Воронежский государственный университет, Воронеж
Marina Ivanovna Falaleeva Фалалеева Марина Ивановна – доцент кафедры биохимии и физиологии клетки, к.б.н., Воронежский государственный университет, Воронеж
Nadezhda R. Komarova Комарова Надежда Романовна – аспирант кафедры биохимии и физиологии клетки, Воронежский государственный университет, Воронеж
Ekaterina Vadimovna Kovaleva Ковалёва Екатерина Вадимовна– магистр 2 года обучения кафедры биохимии и физиологии клетки, Воронежский государственный университет, Воронеж
Alexandra Vladislavovna Mitkevich Миткевич Александра Владиславовна – магистр 2 года обучения кафедры биохимии и физиологии клетки, Воронежский государственный университет, Воронеж

DOI:

https://doi.org/10.17308/sorpchrom.2019.19/650

Ключевые слова:

гель-хроматография, гликолатоксидаза, ионообменная хроматография, электрофорез, кинетика.

Аннотация

В листьях гороха (Pisum sativum L.) и сорго (Sorghum sudanense J.) индуцировалась активность одной из изоформ гликолатоксидазы (ЛЦО-подобная ГО, КФ 1.1.3.15). С помощью многостадийной очистки, включающей фракционирование сульфатом аммония, ионобменную хроматографию на ДЭАЭ-сефацеле и гель-хроматографию на сефадексе G-200 фермент был очищен до электрофоретически гомогенного состояния. Препарат ЛЦО-подобной ГО из листьев гороха обладал удельной активностью 314.37 Е/мг белка, при этом степень очистки составила 207 раз, а выход – 11.5%. Аналогичные показатели фермента из листьев сорго составили: 274.22 Е/мг белка, степень очистки – 143 раз, а выход – 13.8%. Изучены физико-химические свойства фермента из этих объектов. Определена величина молекулярной массы нативной молекулы (182 кДа и 168 кДа для гороха и сорго соответственно), показано, что фермент состоит из четырех субъединиц, молекулярная масса которых определенная ПААГ-электрофорезом в присутствии ДДС-Na равняется 45 кДа для ГО из листьев гороха и 42 кДа – из сорго. Исследованы кинетические и регуляторные свойства: значения констант Михаэлиса, влияние концентрации ионов водорода и температуры на катализируемую реакцию.