ВЭЖХ анализ пролина и 4-гидроксипролина в биологических жидкостях. HPLC analysis of proline and 4-hydroxyproline in biological fluids

  • Alexei A. Dutov Дутов Алексей Александрович - д.м.н. (клиническая фармакология), врач высшей квалификационной категории (клиническая лабораторная диагностика), с.н.с. лаборатории экспериментальной и клинической биохимии и иммунологии научно-исследовательского института медицинской экологии при Медицинской Академии, Чита
  • Denis A. Nikitin Никитин Денис Александрович - заведующий лабораторией химического анализа Забайкальского государственного университета, Чита
  • Maria N. Mishchenko Мищенко Мария Николаевна - к.м.н., ассистент кафедры терапевтической стоматологии Читинской Медицинской Академии
  • Anastasia N. Semenova Семенова Анастасия Николаевна - аспирант кафедры хирургической стоматологии 3-го года обучения Читинской Медицинской Академии
  • Anastasia V. Martynova Мартынова Анастасия Владимировна - аспирант кафедры химии 1-года обучения Забайкальского Государственного Университета
  • Anna V. Sverkunova Сверкунова Анна Викторовна - аспирант кафедры химии 1-года обучения Забайкальского Государственного Университета
  • Ekaterina N. Fedorova Федорова Екатерина Николаевна - аспирант кафедры химии 3-года обучения Забайкальского Государственного Университета
  • Olga N. Konovalova Коновалова Ольга Николаевна, аспирант кафедры химии 3-года обучения Забайкальского Государственного Университета
  • Julia L. Lukyanova Лукьянова Юлия Львовна - врач- ординатор кафедры неврологии Читинской Медицинской Академии
  • Alena V. Yermolina Ермолина Алена Владимировна - врач офтальмолог Краевой больницы № 2
  • Joseph S Pinelis Пинелис Иосиф Семенович - д.м.н., профессор, заведующий кафедрой хирургической стоматологии Читинской Медицинской Академии
Ключевые слова: ВЭЖХ, флюориметрическая детекция, пролин, 4-гидроксипролин, плазма, слюна, слезная жидкость.

Аннотация

Предложен ВЭЖХ метод определения пролина и 4-гидроксипролина в плазме крови, слюне и
слезной жидкости. Биологические образцы депротеинизировали ацетонитрилом. Дериватизировали
иминокислоты 9-флюоренилметилхлороформатом (Fmoc-Cl) после блокады аминокислот с первичными
аминогруппами ортофталевым альдегидом/2-меркаптоэтанолом. Дериваты разделяли с помощью обращено-
фазной (С18) ВЭЖХ и флюориметрической детекцией ex260-em330 нм. Использовали колонки Luna C18(2)
(75 ´ 4.6 мм, 3 мкм), Gemini C18 (150 ´ 4.6 мм, 5 мкм), обе Phenomenex (США), а также высокоскоростные
колонки (100 ´ 4.6 мм) Chromolith Performance RP-18e, Merck (Германия). Для скрининга на
гиперпролинемию у новорожденных предложен метод разделения на высокоскоростных колонках с
монолитным сорбентом Chromolith Performance RP-18e. Простота, воспроизводимость и высокая
чувствительность метода, позволяют его использование в клинической практике для оценки биохимических
изменений при глазных и стоматологических заболеваниях, а также для скрининга на врожденную
гиперпролинемию у новорожденных.

Скачивания

Данные скачивания пока не доступны.

Литература

1. Teerlink T., Tavenier P., Netelenbos J.C. Selective determination of hydroxyproline in
urine by high-performance liquid chromatography using precolumn derivatization. // Clin.
Chim. Acta. 1989. V. 183(3). P. 309-315.
2. Badadani M., Babu S.V., Shetty K.T. Dinitrophenyl derivatization of imino acids,
spectral characteristics and HPLC analysis: application in urinary peptide-derived
hydroxyproline and proline assay. // Ann. Clin. Biochem. 2007. V. 44(2). P. 164-172.
3. Энциклопедия клинических лабораторных тестов / Под ред. Н. Тица. Пер. с
англ. М.: Лабинформ. 1997. 960 C.
4. George Lynn and Louise C. Hellwig. Handbook of derivatization reactions for HPLC.
John Wiley & Sons. Inc. 1998.
5. Green G.D., Reagan K. Determination of hydroxyproline by high pressure liquid
chromatography. // Anal Biochem. 1992. 201(2). P. 265-269.
6. Einarsson S. Selective determination of secondary ammo acids using precolumn
derivatization with 9-fluorenylmethyl chloroformate and reversed-phase high-performance
liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1985. V. 348. P. 213-220.
7. Yaegaki K., Tonzetich J., Ng A.S. Improved high-performance liquid chromatography
method for quantitation of proline and hydroxyproline in biological materials. // J.
Chromatogr. 1986. V. 356(1). P. 163-170.
8. Ikeda M., Sorimachi K., Akimoto K., Yasumura Y. Reversed-phase high-performance
liquid chromatographic analysis of hydroxyproline and proline from collagen by
derivatization with dabsyl chloride. // J. Chromatogr. 1993. V. 621(2). P. 133-138.
9. Inoue H., Moritani K., Date Y., Kohashi K., Tsuruta Y. Determination of free
hydroxyproline and proline in human serum by high-performance liquid chromatography using 4-(5,6-dimethoxy-2-phthalimidinyl)phenylsulfonyl chloride as a pre-column
fluorescent labelling reagent. // J. Chromatogr. B. Biomed. Sci. Appl. 2001. V. 757(2). P.
369-373.
10. Nathans G.R., Gere D.R. Rapid robust separation of hydroxyproline and proline. //
Anal. Biochem. 1992. V. 202(2), P. 262-267.
11. Castelain S., Kamel S., Picard C., Desmet G., Sebert J.L., Brazier M. A simple and
automated HPLC method for determination of total hydroxyproline in urine. Comparison
with excretion of pyridinolines. Clin. Chim. Acta. 1995. V. 235(1). P. 81-90.
12. Hutson P.R., Crawford M.E., Sorkness R.L. Liquid chromatographic determination
of hydroxyproline in tissue samples. // J. Chromatogr. B. Analyt. Technol. Biomed. Life
Sci. 2003. V. 791(1-2). P. 427-430.
13. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. М.: Мир.
1991. 544 с.
14. Fekkes D. State-of-the-art of high-performance liquid chromatographic analysis of
aminoacids in physiological samples (review). // J. Chromatogr. B. 1996. V. 682. P. 3-22.
15. Hubbard R.W., Chambers J.G., Sancher A. Amino acid analysis in plasma: studies in
sample preparation. // J. Chromatogr. 1988. V. 431. P. 163-169.
Опубликован
2019-11-20
Как цитировать
Dutov, A. A., Nikitin, D. A., Mishchenko, M. N., Semenova, A. N., Martynova, A. V., Sverkunova, A. V., Fedorova, E. N., Konovalova, O. N., Lukyanova, J. L., Yermolina, A. V., & Pinelis, J. S. (2019). ВЭЖХ анализ пролина и 4-гидроксипролина в биологических жидкостях. HPLC analysis of proline and 4-hydroxyproline in biological fluids. Сорбционные и хроматографические процессы, 13(2). извлечено от https://journals.vsu.ru/sorpchrom/article/view/1607
Выпуск
Том 13 № 2 (2013): Сорбционные и хроматографические процессы
Раздел
Статьи

Наиболее читаемые статьи этого автора (авторов)