ВЭЖХ анализ пролина и 4-гидроксипролина в биологических жидкостях. HPLC analysis of proline and 4-hydroxyproline in biological fluids
Ключевые слова:
ВЭЖХ, флюориметрическая детекция, пролин, 4-гидроксипролин, плазма, слюна, слезная жидкость.Аннотация
Предложен ВЭЖХ метод определения пролина и 4-гидроксипролина в плазме крови, слюне и
слезной жидкости. Биологические образцы депротеинизировали ацетонитрилом. Дериватизировали
иминокислоты 9-флюоренилметилхлороформатом (Fmoc-Cl) после блокады аминокислот с первичными
аминогруппами ортофталевым альдегидом/2-меркаптоэтанолом. Дериваты разделяли с помощью обращено-
фазной (С18) ВЭЖХ и флюориметрической детекцией ex260-em330 нм. Использовали колонки Luna C18(2)
(75 ´ 4.6 мм, 3 мкм), Gemini C18 (150 ´ 4.6 мм, 5 мкм), обе Phenomenex (США), а также высокоскоростные
колонки (100 ´ 4.6 мм) Chromolith Performance RP-18e, Merck (Германия). Для скрининга на
гиперпролинемию у новорожденных предложен метод разделения на высокоскоростных колонках с
монолитным сорбентом Chromolith Performance RP-18e. Простота, воспроизводимость и высокая
чувствительность метода, позволяют его использование в клинической практике для оценки биохимических
изменений при глазных и стоматологических заболеваниях, а также для скрининга на врожденную
гиперпролинемию у новорожденных.
