Применение метода тонкослойной хроматографии для определения степени гидролиза соевого лецитина
Аннотация
Целью настоящего исследования является определение степени ферментативного гидролиза соевого лецитина с помощью метода тонкослойной хроматографии в сочетании с современной программой обработки данных визуализации. Гидролиз фосфолипидов осуществляли под действием ферментного препарата фосфолипазы А2 (ФЛА2) в присутствии ионов кальция в течение 2 ч при температуре 50°С и pH 5.7. Хроматографическое разделение компонентов реакционной среды проводили через 10, 20, 30, 60, 90 и 120 мин после внесения ферментного препарата ФЛА2 в системе хлороформ : метанол : аммония гидроксид в соотношении 6.5 : 2.5 : 0.4 (об/об/об). Идентифицированы следующие фосфолипиды и их лизоформы: Rf = 0.41±0.03 для фосфатидилэтаноламина (ФЭ), Rf = 0.28±0.02 для фосфатидилхолина (ФХ), Rf = 0.09±0.01 для фосфатидилинозитола (ФИ), Rf = 0.06±0.01 для фосфатидной кислоты (ФК), Rf = 0.15±0.02 для лизофосфатидилэтаноламина (ЛФЭ), Rf = 0.08±0.01 для лизофосфатидилхолина (ЛФХ), Rf = 0.03±0.01 для лизофосфатидилинозитола (ЛФИ) и Rf = 0.02±0.01 для лизофосфатидной кислоты (ЛФК). Показано, что в соевом лецитине до ферментативной реакции присутствуют ФХ, ФЭ, ФИ и ФК, содержание которых после внесения ферментного препарата ФЛА2 уменьшается за счет образования ЛФХ, ЛФЭ, ЛФИ и ЛФК соответственно. Получена зависимость степени гидролиза (α, %) ФХ от продолжительности ферментативной реакции. Установлено, что интенсивное превращение ФХ в ЛФХ под действием ферментного препарата ФЛА2 наблюдается в течение 60 мин (α = 82%). Дальнейшая конверсия ФХ происходит незначительно: по истечении 90 мин – 84%, после 120 мин – 87%, что обусловлено ингибированием активности фермента конечным продуктом реакции.
Скачивания
Литература
Zharkova I.M., Rudakov O.B., Poljanskij K.K., Rosljakov Ju.F. Lecitiny v tehnologijah produktov pitanija. Voronezh, VGUIT, 2015, 256 p. (In Russ.)
Hwang H., Chun H., Kim D., Shin M., Kim Y., In S., Kim T., Kang N., Lysophosphatidylcholine exerts an anti‐skin photoaging effect via heat shock protein 70 induction, J. Cosmet. Dermatol., 2021; 20(12): 4060-4067. https://doi.org/10.1111/jocd.14068
Ahmmed M.K., Hachem M., Ahmmed F., Rashidinejad A., Oz F., Bekhit A.A., Carne A., Bekhit A.E.-D.A., Marine fish-derived lysophosphatidylcholine: properties, extraction, quantification, and brain health application, Molecules, 2023; 28(7): 3088. https://doi.org/10.3390/molecules28073088
Brautigan D.L., Li R., Kubicka E., Turner S.D., Garcia J.S., Weintraut M.L., Wong E.A., Lysolecithin as feed additive enhances collagen expression and villus length in the jejunum of broiler chickens, Poult. Sci., 2017; 96(8): 2889-2898. https://doi.org/10.3382/ps/pex078
Wu Y., Wang T., Soybean lecithin fractionation and functionality, J. Am. Oil Chem. Soc., 2003; 80(4): 319-326. https://doi.org/10.1007/s11746-003-0697-x
Murakami M., Taketomi Y., Sato H., Yamamoto K., Secreted phospholipase A2 revisited, J. Biochem., 2011; 150(3): 233-255. https://doi.org/10.1093/jb/mvr088
Ivanusec A., Sribar J., Krizaj I., Secreted phospholipases A2 – not just enzymes: revisited, Int. J. Biol. Sci., 2022; 18(2): 873-888. https://doi.org/10.7150/ijbs.68093
Kim R.R., Chen Z., Mann T.J., Bastard K., Scott K.F., Church W.B., Structural and functional aspects of targeting the secreted human group IIA phospholipase A2, Molecules, 2020; 25(19): 4459. https://doi.org/10.3390/molecules25194459
Jain M.K., Berg O.G., Coupling of the i-face and the active site of phospholipase A2 for interfacial activation, Curr. Opin. Chem. Biol., 2006; 10(5): 473-479. https://doi.org/10.1016/j.cbpa.2006.08.015
Alekseeva A.S., Boldyrev I.A., Fosfolipaza A2. Metody monitoringa aktivnosti, Biologicheskie membrany: Zhurnal membrannoj i kletochnoj biologii, 2020; 37(5): 323-336. https://doi.org/10.31857/S0233475520050035 (In Russ.)
Litvinko N.M., Gidroliz UF-inducirovannogo perekisno-okislennogo fosfatidilholina fosfolipazami raznoj substratnoj specifichnosti, Izvestija Nacional'noj akademii nauk Belarusi. Serija himicheskih nauk, 2021; 57(2): 195-205. https://doi.org/10.29235/1561-8331-2021-57-2-195-205 (In Russ.)
Mouchlis V.D., Bucher D., McCammon J.A., Dennis E.A., Membranes serve as allosteric activators of phospholipase A2, enabling it to extract, bind, and hydrolyze phospholipid substrates, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2015; 112(6): 516-525. https://doi.org/10.1073/pnas.1424651112
Safonova E.F., Nazarova A.A., Selemenev V.F., Brezhneva T.A., Slivkin A.I., Vybor optimal'nyh parametrov razdelenija fosfolipidov v tonkom sloe sorbenta, Himiko-farmacevticheskij zhurnal, 2002; 36(4): 41-43. https://doi.org/10.30906/0023-1134-2002-36-4-41-43 (In Russ.)
Dynska-Kukulska K., Ciesielski W., Methods of extraction and thin-layer chromatography determination of phospholipids in biological samples, Rev. Anal Chem., 2012; 31(1): 43-56. https://doi.org/10.1515/revac-2011-0030
Kogan Ju.D., Gol'cberg M.A., Otechestvennoe oborudovanie dlja kolichestvennoj tonkoslojnoj hromatografii, Rossijskij himicheskij zhurnal, 2003; 47(1): 136-140. (In Russ.)
Maljavina V.V., Primenenie programmnyh sredstv vizualizacii i obrabotki dannyh TSH-analiz pri proizvodstve fosfolipidnyh produktov, Farmacija, 2003; 2: 26-30. (In Russ.)
Avanti Polar Lipids. TLC solvent systems – lipid migration. Available at: https://avantilipids.com/tech-support/analytical-procedures/tlc-solvent-systems (accessed 4 May 2023).
Kates M. Tehnika lipidologii. Vydelenie, analiz i identifikacija lipidov. M., Mir Publ., 1975, 322 p.
Sikorskaja A.S., Nazarova A.A., Selemenev V.F., Podbor optimal'nyh uslovij razdelenija fosfolipidnyh kompleksov, poluchennyh iz semjan podsolnechnika, Sorbcionnye i hromatograficheskie processy, 2009; 9(2): 215-220. (In Russ.)
Helmerich G., Koehler P., Comparison of methods for the quantitative determination of phospholipids in lecithins and flour improvers, J. Agric. Food Chem., 2003; 51(23): 6645-6651. https://doi.org/10.1021/jf0345088
