Активность глутатионредуктазы при нарушении функции печени и регуляция интермедиатами цикла Кребса каталитического дей-ствия фермента, выделенного с помощью хроматографических ме-тодов
Аннотация
Целью настоящей работы явилось определение активности глутатионредуктазы (ГР, КФ 1.6.4.2) в сыворотке крови больных с алкогольным гепатитом (АГ) и в сыворотке крови и печени крыс с экспериментальным токсическим гепатитом (ЭТГ), а также разработка схемы очистки фермента из печени экспериментальных животных с применением хроматографических методов. В эксперименте использовали сыворотку крови практически здоровых лиц с нормальными показателями общего и биохимического анализов крови (контрольная группа пациентов), людей, которым был поставлен диагноз алкогольный гепатит (АГ), а также сыворотку и печень крыс контрольной группы и животных с ЭТГ. Патологическое состояние у экспериментальных животных моделировали путем перорального введения четыреххлористого углерода – органоспецифического токсина, обладающего гепатотропным эффектом, в виде 33% раствора в вазелиновом масле из расчета 64 мкл токсина на 100 г веса животного. Забой животных производили на 4 сутки после введения токсического агента. Контрольным животным вводили соответствующую аликвоту вазелинового масла. Активность ГР определяли спектрофотометрически на СФ-56 при 340 нм. Общее количество белка определяли по методу Лоури. Для исследования регуляторных свойств фермента была проведена его очистка из печени крыс контрольной группы и животных с индуцированным токсическим гепатитом с помощью методов разделения белков сульфатом аммония, а также гель-фильтрации через сефадекс G-25 и ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. В результате были получены ферментные препараты ГР, очищенные в 54.5 и 49.1 раза из печени крыс контрольной группы и животных с ЭТГ. Установлено, что в процессе ионообменной хроматографии на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой фермент из печени исследуемых групп животных десорбировался в виде одного пика при концентрации KCl 100 мМ. С использованием полученных ферментных препаратов выявлены различия в регуляции активности ГР под действием интермедиатов цикла Кребса, что, очевидно, связано с конформационными модификациями молекулы фермента в условиях оксидативного стресса, развивающегося при патологии.
Скачивания
Литература
Rusyn I., Arzuaga X., Cattley R.C., Corton J.Ch., Ferguson S.S., Godoy P., Guyton K.Z., Kaplowitz N., Khetani S.R., Roberts R., Roth R.A., Smith M.T., Key Characteristics of Human Hepatotoxicants as a Basis for Identifi-cation and Characterization of the Causes of Liver Toxicity, Hepatology, 2021; 74(6): 3486-3496. https://doi.org/10.1002/hep.31999
You M., Arteel G. E., Effect of ethanol on lipid metabolism, Hepatology, 2019; 70: 237-248. https://doi.org/10.1016/j.jhep.2018.10.037
Sun H., Chen L., Zhou W., Hu L. Liang Li 1, Tu Q., Chang Y., Liu Q., Sun X., Wu M., Wang H., The protective role of hy-drogen-rich saline in experimental liver injury in mice, Journal of Hepatology, 2011; 54 (3): 471-480. https://doi.org/10.1016/j.jhep.2010.08.011.
Agarkov A.A. Diss. kand. biol. nauk. Voronezh, 2009, 222 р. (In Russ.)
Iskusnykh I.Y., Kryl’skii E.D., Bra-zhnikova D.A., Popova T.N., Shikhaliev K.S., Shulgin K.K., Matasova L.V., Popov S.S., Zhaglin D.A., Zakharova A.A., Popova N.R., Fattakhov N., Novel Antioxidant, Deethylated Ethoxyquin, Protects against Carbon Tetrachlo-ride Induced Hepatotoxicity in Rats by Inhibit-ing NLRP3 Inflammasome Activation and Apoptosis, Antioxidants, 2021; 10(1): 122. https://doi.org/10.3390/antiox10010122
Chen M., Zhong W., Xu W., Alcohol and the mechanisms of liver disease, Journal of Gastroenterology and Hepatology, 2023; 38: 1233-1240. https://doi.org/10.1111/jgh
Jakupova T.G., Karimov D.O., Bakirov A.B. Izmenenie jekspressii genov oksida-tivnogo stressa pri toksicheskih gepatitah raznoj jetiologii i ih korrekcija, Jeksperi-mental'naja i klinicheskaja gastrojenterologija, 2023; 216(8): 120-126. https://doi.org/10.31146/1682-8658-ecg-216-8-120-126 (In Russ.)
Babior B.M., Phagocytes and oxidative stress, Am. J. Med., 2000; 109 (1): 33-44.
Dudnik L.B., Viksna L.M., Majore A.Ja., Peroksidnoe okislenie lipidov i ego svjaz' s izmeneniem sostava i antiokislitel'nyh svojstv lipidov pri komatogennyh formah os-trogo virusnogo gepatita V, Voprosy medicinskoj himii, 2000; 6: 597-609. (In Russ.)
Kryl'skii E.D., Sinitsyna D.A., Popova T.N., Shikhaliev K.S., Medvedeva S.M., Matasova L.V., Mittova V.O., The new antiox-idant 1-benzoyl-6-hydroxy-2,2,4-trimethyl-1,2-dihydroquinoline has a protective effect against carbon tetrachloride-induced hepatic injury in rats, The Journal of Biomedical Research, 2022; 36(6): 423-434. https://doi.org/10.7555/JBR.36.20220098
Blinova T.V., Strahova L.A., Troshin V.V., Kolesov S.A., Umnjagina I.A., Ivanova Ju.V., Glutation kak prognosticheskij faktor riska narushenija zdorov'ja rabotajushhih lic, Analiz riska zdorov'ju, 2023; 2: 140-148. https://doi.org/10.21668/health.risk/2023.2.13 (In Russ.)
Kryl’skii, E.D.; Kravtsova, S.E.; Popova, T.N.; Matasova, L.V.; Shikhaliev, K.S.; Medvedeva, S.M., 6-Hydroxy-2,2,4-trimethyl-1,2-dihydroquinoline Demonstrates Anti-Inflammatory Properties and Reduces Ox-idative Stress in Acetaminophen-Induced Liver Injury in Rats, Curr. Issues Mol. Biol., 2023; 45: 8321-8336. https://doi.org/10.3390/cimb45100525
Fedorova N.Ju. Avtoref. dis kand. biol. nauk. Voronezh, 1999, 24 p. (In Russ.)
Popova T.N., Shul'gin K.K., Shihaliev H.S., Kryl'skij E.D., Matasova L.V., Medvedeva S.M., Popov S.S., Verevkin A.N. Zajavka na patent. № 2017136371. 2019. (In Russ.)
Selemenev V.F., Rudakov O.B., Slav-inskaja G.V., Drozdova N.V. Pigmenty pish-hevyh proizvodstv (melanoidy). Moskva, DeLi print., 2008, 246 р. (In Russ.)
Kramarenko V.F. Toksikologicheskaja himija. Moskva, Kniga po Trebovaniju, 2013, 445 р. (In Russ.)
Glants S. Mediko-biologicheskaya statistika. Moskva, Praktika, 1998, 459 p. (In Russ.)
Lazebnik L. B., Golovanova E. V., Tarasova L. V., Krivosheev A. B., Sas E. I., Eremina E. Ju., Truhan D. I., Hlynova O. V., Cyganova Ju. V., Alkogol'naja bolezn' pecheni (ABP) u vzroslyh, Jeksperimental'naja i klinicheskaja gastrojenterologija, 2020; 174(2): 4-28. (In Russ.)
Voronina T.A., Rol' oksidativnogo stressa i antioksidantov pri dezadaptacii razlichnogo geneza, Farmacija i farmakologija, 2015; 3(5): 8-17. https://doi.org/10.19163/2307-9266-2015-3-5s (In Russ.)
Agarkov A.A., Popova T.N., Se-menihina A.V., Kataliticheskie svojstva gluta-tionreduktazy iz pecheni krysy v norme i pri toksicheskom gepatite, Biomedicinskaja himija, 2009; 55(2): 169-176. (In Russ.)
Pashkov A.N., Popov S.S., Semenihina A.V., Rahmanova T.I. Sostojanie sistemy glu-tationa i aktivnost' nekotoryh NADPH-generirujushhih fermentov v pecheni krys pri dejstvii melatonina v norme i pri toksicheskom gepatite, Bjulleten' jeksperimental'noj biologii i mediciny, 2005;139(5): 520-524. (In Russ.)
Jur'eva Je.A., Novikova N.N., Dlin V.V., Vozdvizhenskaja E.S., Molekuljarnyj stress i hronicheskie narushenija obmena vesh-hestv, Rossijskij vestnik perinatologii i pedi-atrii, 2020; 65(5): 12-22. (In Russ.)
Novikov V.E., Levchenkova O.S., Pozhilova E.V., Rol' aktivnyh form kisloroda v fiziologii i patologii kletki i ih farma-kologicheskaja reguljacija, Obzory po klinich-eskoj farmakologii i lekarstvennoj terapii, 2014; 12: 13-21. (In Russ.)
Luk'janova L.D., Sovremennye prob-lemy adaptacii k gipoksii. Signal'nye me-hanizmy i ih rol' v sistemnoj reguljacii, Pat. fiziol. i jeksperim. Terapija, 2011; 1: 3-19. (In Russ.)
Sazontova T.G., Arhipenko Ju.V., Rol' svobodnoradikal'nyh processov i redoks-signalizacii v adaptacii organizma k izmeneniju urovnja kisloroda, Ros. fiziol. zhurn. im. I.I. Sechenova, 2005; 91(6): 636-655. (In Russ.)
