Суперпродукция, выделение и очистка функционально активного бактериоферритина Dps E.coli

  • Viktoria O. Pokusaeva Покусаева Виктория Олеговна – магистрант, кафедра Биофизики и биотехнологии, ФБГОУ ВПО «Воронежский государственный университет», Воронеж
  • Sergei S. Antipov Антипов Сергей Сергеевич – к.б.н., ассистент, кафедра Биофизики и биотехнологии ФБГОУ ВПО «Воронежский государственный университет», Воронеж
  • Uliana S. Shvyreva Швырева Ульяна Сергеевна – аспирант ФГБОУ ВПО «Пущинский государственный естественнонаучный институт», Пущино, Московская область, Лаборатория функциональной геномики и клеточного стресса ФГБУН «Институт биофизики клетки Российской академии наук», Пущино
  • Maria N. Tutukina Тутукина Мария Николаевна – к.б.н., лаборатория функциональной геномики и клеточного стресса ФГБУН «Институт биофизики клетки Российской академии наук», Пущино
Ключевые слова: Escherichia coli, бактериоферритин Dps, ДНК, хроматография.

Аннотация

Разработан метод выделения и очистки рекомбинантного белка Dps Escherichia coli.
Метод включает клонирование гена dps в вектор pGEM, последующую суперпродукцию белка в
штамме BL21*(DE3) E. coli, ионообменную хроматографию на ДЕАЕ-Сефадексе-А25,
фракционирование белков сульфатом аммония и гель-фильтрацию на Сефадексе-G200.
Разработанный метод позволяет получить электрофоретически гомогенный и функционально
активный белок Dps.

Скачивания

Данные скачивания пока не доступны.

Литература

1. Stillman T. J., Connolly P. P., Latimer C. L. et al. Andrews S. C., Treffry A., Guest J.
R., Artymiuk P. J., Harrison P. M. Insights into the effects on metal binding of the
systematic substitution of five key glutamate ligands in the ferritin of Escherichia coli // J.
Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 26275-26286.
2. Zhao G., Ceci P., Ilari A. et al. Iron and hydrogen peroxide detoxification properties
of DNA-binding protein from starved cells // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 27689–
27696.
3. Haikarainen T., Papageorgiou A.C. Dps-like proteins: structural and functional
insights into a versatile protein family // Cell Mol. Life Sci. 2010. V. 67. P. 341–351.
4. Grant R.A., Filman D.J., Finkel S.E. et al. The crystal structure of Dps, a ferritin
homolog that binds and protects DNA // Nat. Struct. Biol. 1998. V. 5(4). P. 294–303.
5. Антипов С. С., Курганов К. В., Чемерис К. С. и др. Бактериоферритин как
биосенсор и наноструктура // Вестник биотехнологии и физико-химической
биологии им. Ю. А.Овчинникова. 2007. Т. 3. С. 40-44.
6. Швырева У.С., Тутукина М. Н., Озолинь О.Н. Бактериоферритин: свойства и
структурно-функциональная организация регуляторной области гена Dps //
Биофизика. 2011. Т. 56(2). С. 821-830
7. Ali Azam T., Iwata A., Nishimura A. et al. Growth phase-dependent variation in
protein composition of the Escherichia coli nucleoid // J. Bacteriol. 1999. V. 181. P. 6361–
6370.
8. Davis B.J. Disc electroforesis II. Method and application to human serum protein //
Ann. N.Y. Acad. Sci. 1994. Vol. 121. P. 404-427.
9. Shavkunov K. S., Masulis I. S., Tutukina M. N. et al. Gains and unexpected lessons
from genome-scale promoter mapping // Nucleic Acids Res. 2009. V. 37. P. 4919-4931.
10. Shevchenko A., Wilm M., Vorm O. Mass spectrometric sequencing of protein from
silver-stained polyarylamide gels // Anal. Chem., 1996. V.68. P 850 – 858.
11. Almiron M., Link A.J., Furlong D. et al. A novel DNA-binding protein with
regulatory andprotective roles in starved Escherichia coli // Genes Dev. 1992. V. 6. P.
2646–2654.
12. Azam T. A., Ishihama A. Twelve Species of the Nucleoid-associated Protein from
Escherichia coli. Sequence recognition specificity and DNA binding affinity // J. Biol.
Chem., 1999. V. 274. P. 33105-33113.
13. Ceci P., Cellai S., Falvo E. et al. DNA condensation and self-aggregation of
Escherichia coli Dps are coupled phenomena related to the properties of the N-terminus //
Nucleic Acids Res. 2004. V. 32. P. 5935–5944
Опубликован
2019-11-25
Как цитировать
Pokusaeva, V. O., Antipov, S. S., Shvyreva, U. S., & Tutukina, M. N. (2019). Суперпродукция, выделение и очистка функционально активного бактериоферритина Dps E.coli. Сорбционные и хроматографические процессы, 12(6). извлечено от https://journals.vsu.ru/sorpchrom/article/view/1891