On-line концентрирование белков в условиях капиллярной электрохроматографии с использованием PLOT-колонок на основе сверхразветвленных полимеров

Elena A. Bessonova; Vlada U. Koroleva; Lyudmila A. Kartsova; Vera E. Potolitsyna

Elena A. Bessonova Бессонова Елена Андреевна – доцент кафедры органической химии Санкт- Петербургского государственного университета, Санкт-Петербург, тел. (812) 428-40-44
Vlada U. Koroleva Королева Влада Юрьевна – магистрант кафедры аналитической химии Санкт- Петербургского государственного университета, Санкт-Петербург
Lyudmila A. Kartsova Карцова Людмила Алексеевна – д.х.н., профессор кафедры органической химии, Санкт- Петербургского государственного университета, Санкт-Петербург
Vera E. Potolitsyna Потолицына Вера Евгеньевна – аспирант кафедры аналитической химии Санкт- Петербургского государственного университета, Санкт-Петербург

Ключевые слова: капиллярная электрохроматография, PLOT-колонки, сверхразветвленные полимеры, белки, on-line концентрирование.

Аннотация

В работе исследованы возможности новых водорастворимых олигосахаридных производных
сверхразветвленного полиэтиленимина с массой ядра 25 кДа и различной степенью
функционализации мальтозой (PEI-Mal А – 77% модификации, PEI-Mal С – 32% модификации) в
качестве стационарной фазы в капиллярной электрохроматографии (КЭХ) для разделения и
концентрирования белков (альбумин, инсулин, миоглобин, лизоцим). Синтезированы колонки с
нанесенным тонким пористым слоем сорбента на внутреннюю поверхность кварцевого капилляра
(PLOT-колонки) на основе сверхразветвленного полимера. Выявлены возможности различных
вариантов on-line концентрирования для снижения пределов обнаружения аналитов. Получены
сравнительные оценочные характеристики по пределам обнаружения, эффективности, селективности
разделения. Показано, что сочетание электростэкинга со стэкингом с большим объемом вводимой
пробы позволяет достигнуть значений факторов концентрирования до 1000. Проведена апробация
установленных закономерностей на реальных объектах (моча, сыворотка крови).

Скачивания

Данные скачивания пока не доступны.

Литература

1.Seiler M. Hyperbranched polymers: phase behavior and new applications in the field of
chemical engineering // Fluid Phase Equilibria. 2006. V. 241. P. 155-174.
2.Kolhe P., Misra E., Kannan R.M. et al. Drug complexation, in vitro release and cellular
entry of dendrimers and hyperbranched polymers // International J. of Pharmaceutics.
2003. V. 259. P. 143-160.
3.Klajnert B., Appelhans D. et al. The influence of densely organized maltose shells on
the biological properties of poly(propylene imine) dendrimers: new effects dependent on
hydrogen bonding // Chem. Eur. J. 2008. V. 14. P. 7036-7041.
4.Azagarsamy M. A., Yesilyurt V., Thayumanavan S. Disassembly of dendritic micellar
containers due to protein binding // J. Am. Chem. Soc. 2010. V. 132. P. 4550-4551.
5.Pedziwiatr E., Shcharbin D., Chonco L. et al. Binding properties of water-soluble
carbosilane dendrimers // J. Fluoresc. 2009. V. 19. P. 267-275.
6.Shcharbin D., Janicka M., Wasiak M. et al. Serum albumins have five sites for binding
of cationic dendrimers // Biochim. Biophys. Acta. 2007. V. 1774. P. 946-951.
7.Stathakis C., Arriaga E.A., Dovichi N.J. Cationic and anionic polymeric additives for
wall deactivation and selectivity control in the capillary electrophoretic separation of
proteins in food samples // J. Chromatogr. A. 1998. V. 817. P. 227-232.
8.Liu Q., Tian J., Zhang C., Yang H. et al. Cationic poly(amidoamine) dendrimers as
additives for capillary electroseparation and detection of proteins // Electrophoresis. 2011.
V. 32. P. 1302-1308.
9.Montealegre C., Rasines B., Gomez R. et al. Characterization of carboxylateterminated
carbosilane dendrimers and their evaluation as nanoadditives in capillary
electrophoresis for vegetable protein profiling // J. Chromatogr. A. 2012. V. 1234. P. 16-
21.
10. Boonyakong C., Tucker S.A. Capillary electrophoresis using core-based
hyperbranched polyethyleneimine (CHPEI) static-coated capillaries // J. Sep. Sci. 2009. V.
32. P. 3489-3496.
11. Shou C., Zhang Z. Preparation and characterization of hyperbranched polyester
capillary columns used for the separation of basic proteins // J. of Applied Polymer
Science. 2009. V. 111. P. 2141-2147.
12. Shou C., Song N., Zhang Z. Synthesis of hyperbranched poly(3-methyl-3-
hydroxymethyloxetane) and their application to separate basic proteins by adsorption
coated column // J. of Applied Polymer Science. 2010. V. 116. P. 2473-2479.
13. Appelhans D., Komber H., Abdul Quadir M. et al. Hyperbranched PEI with various
oligosaccharide architectures: Synthesis, characterization, ATP complexation and cellular
uptake // J. Biomacromolecules 2009. V. 10. P. 1114-1124.
14. Burgi D.S., Chien R.L. Improvement in the method of sample stacking for gravity
injection in capillary zone electrophoresis // Analytical Biochemistry. 1992. V. 202.
P. 306-309.
15. Бессонова Е.А., Поликарпов Н.А., Карцова Л.А. и др. Исследование
возможностей новых сверхразветвленных полимеров в качестве
псевдостационарных фаз в электрокинетической хроматографии при определении
белков //Ж. Вестник СПбГУ. Сер. 4. 2011. Вып. 1. С. 100-106.