Активность и каталитические свойства глутатионпероксидазы при токсическом поражении печени
Аннотация
Целью работы было изучение активности глутатионпероксидазы (ГП, КФ 1.11.1.9.) при нарушении функции печени, а также очистка фермента с применением хроматографических методов
для дальнейшего изучения кинетических свойств. В эксперименте использовали сыворотку крови
пациентов с алкогольным гепатитом, находящихся на лечении в стационаре. В качестве группы сравнения в исследование были включены практически здоровые лица с нормальными показателями общего и биохимического анализов крови. Экспериментальный токсический гепатит (ЭТГ) моделировали путем перорального введения четыреххлористого углерода самцам белых лабораторных крыс (Rattus norvegicus) Wistar. В контрольную группу входили животные, находящиеся на стандартном режиме вивария. Активность ГП определяли спектрофотометрически при длине волны 340 нм. с помощью сопряженной ферментативной реакции с глутатионредуктазой. Очистку ГП из печени крысы в нормальных условиях и при ЭТГ проводили путем гомогенизации материала, гель-фильтрации на Сефадекс G-25, ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, концентрирования фракций фермента с помощью ультрафильтрации на ячейке Amicon, гель-хроматографии на Toyopearl HW-65.
Чистоту полученного ферментного препарата оценивали электрофоретическим методом. Общее количество белка в пробах определяли по методу Лоури. Показано возрастание активности маркерных ферментов развития патологии в сыворотке крови пациентов с заболеванием печени и крыс с ЭТГ.
Также обнаружено изменение активности ГП в сыворотке крови больных алкогольным гепатитом и в
гомогенате печени крыс при ЭТГ по сравнению с контрольным уровнем. В ходе эксперимента были
получены ферментные препараты из печени контрольных животных и крыс с ЭТГ с удельной актив-
ностью 1.46 и 3.64 Е/мг; с выходом 7.2 и 8.0% соответственно. В дальнейшем они использовались для
изучения кинетических свойств ГП. Установлено, что при токсическом гепатите ГП менее устойчива
к длительному воздействию температур по сравнению с ферментом из печени контрольных животных. Кроме того, при патологии происходит возрастание температурного оптимума и константы
инактивации. На основании полученных результатов можно предположить, что изменение активности фермента при нарушении функции печени может быть связано с конформационными перестройками его молекулы в условиях повышенной генерации свободных радикалов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Калинин А.В. // Фарматека. 2005. №1(97). С. 48-55.
2. Горбенко М.В., Попова Т.Н., Шульгин К.К., Попов С.С. // Экспериментальная и
клиническая фармакология. 2013. Т. 76. № 10. С. 12-15.
3. Андреещева Е.М., Попова Т.Н., Артюхов В.Г., Матасова Л.В. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2004. № 4. С. 399-402.
4. Davis B.J., Jones R.G., Farmer G.R. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1964. Vol. 121. рр. 404-427.
5. Shevchenko A., Wilm H., Vorm O. // Anal. Chem. 1996. Vol. 68. pp.850-858.
6. Lowry О.Н., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. // J. Biol. Chem. 1951. Vol. 193. pp. 265-275.
7. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М. Практика. 1999. 459 с.
8. Kim J.H., Park S.H., Nam S.W., Choi Y.H. // Int. J. Mol. Sci. 2012. Vol. 13. pp. 5740-5750.
9. Попов С.С., Пашков А.Н., Попова Т.Н., Семенихина А.В. и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2007. Т. 70. № 1. С. 48-51.
10. Попов С.С., Пашков А.Н., Попова Т.Н., Золоедов В.И. и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. № 8. С. 170-173.
